PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIE TESTU
Malaria to przenoszona przez komary, hemolityczna choroba przebiegająca z gorączką, która zaraża ponad 200 milionów ludzi i zabija ponad 1 milion ludzi rocznie.Wywołują ją cztery gatunki Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale i P. malariae.Wszystkie te plazmodia infekują i niszczą ludzkie erytrocyty, wywołując dreszcze, gorączkę, anemię i splenomegalię.P. falciparum powoduje więcej poważnych chorób niż inne gatunki plazmodialne i odpowiada za większość zgonów z powodu malarii.P. falciparum i P. vivax są najczęstszymi patogenami, jednak występuje znaczne zróżnicowanie geograficzne w rozmieszczeniu gatunków.
Tradycyjnie malarię rozpoznaje się na podstawie obecności organizmów na grubych rozmazach krwi obwodowej barwionych metodą Giemsy, a różne gatunki zarodźca rozróżnia się na podstawie ich obecności w zakażonych erytrocytach1.Technika ta umożliwia dokładną i niezawodną diagnozę, ale tylko wtedy, gdy jest wykonywana przez wykwalifikowanych mikroskopistów przy użyciu określonych protokołów2, co stanowi poważne przeszkody dla odległych i biednych obszarów świata.
Zestaw szybkiego testu Malaria Pf / Pan Antigen został opracowany w celu rozwiązania tych przeszkód.Test wykorzystuje parę przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych przeciwko białku specyficznemu dla P. falciparum, białko powtórzeń histydyny II (pHRP-II) oraz parę przeciwciał monoklonalnych przeciwko dehydrogenazie mleczanowej plazmodium (pLDH), białku wytwarzanemu przez cztery gatunki zarodźca, co umożliwia jednoczesne wykrycie i zróżnicowanie zakażenia P. falciparum i/lub dowolnym z pozostałych trzech zarodźców.Może być wykonywany przez nieprzeszkolony lub minimalnie wykwalifikowany personel, bez sprzętu laboratoryjnego.
ZASADA
Zestaw Pf/Pan Malaria Rapid Test to test immunologiczny metodą chromatografii z przepływem bocznym.W skład pasków testowych wchodzą: 1) podkładka z koniugatem koloru bordowego zawierająca mysie przeciwciało anty-pHRP-II skoniugowane ze złotem koloidalnym (koniugaty pHRP II-złoto) oraz mysie przeciwciało anty-pLDH skoniugowane ze złotem koloidalnym (koniugaty pLDH-złoto),
2) pasek membrany nitrocelulozowej zawierający dwa paski testowe (paski Pan i Pv) oraz pasek kontrolny (pasek C).Prążek pan jest wstępnie pokryty przeciwciałem monoklonalnym anty-pLDH, za pomocą którego można wykryć infekcję dowolnym z czterech gatunków plazmodiów, prążek Pf jest wstępnie pokryty przeciwciałami poliklonalnymi anty-pHRP-II w celu wykrycia zakażenia Pf, a prążek C pokryty jest kozią anty-mysią IgG.
Podczas testu do studzienki na próbkę (S) kasety testowej dozuje się odpowiednią objętość próbki krwi, a do studzienki na bufor (B) dodaje się bufor do lizy.Bufor zawiera detergent, który powoduje lizę krwinek czerwonych i uwalnia różne antygeny zarodźca, które migrują w wyniku działania kapilarnego przez pasek trzymany w kasecie.pHRP-II, jeśli jest obecne w próbce, zwiąże się z koniugatami pHRP-II-złoto.Kompleks immunologiczny jest następnie wychwytywany na membranie przez wstępnie powlekane przeciwciała anty-pHRPII, tworząc bordowy prążek Pf, wskazujący na pozytywny wynik testu Pf.pLDH, jeśli jest obecne w próbce, zwiąże się z koniugatami złota pLDH.Kompleks immunologiczny jest następnie wychwytywany na membranie przez wstępnie powleczone przeciwciało anty-pLDH, tworząc bordowy prążek Pan, wskazujący na pozytywny wynik testu Plasmodium.W przypadku braku prążka Pan można zalecić pozytywny wynik testu na obecność któregokolwiek z pozostałych trzech plazmodiów.
Brak jakichkolwiek prążków testowych (Pan i Pf) sugeruje wynik ujemny.Test zawiera kontrolę wewnętrzną (prążek C), który powinien wykazywać bordowy prążek kompleksu immunologicznego koziej anty-mysiej IgG / mysiej IgG (koniugaty pHRP-II i pLDH-złoto) niezależnie od zabarwienia któregokolwiek z prążków testowych.W przeciwnym razie wynik testu jest nieważny i próbka musi zostać ponownie przetestowana przy użyciu innego urządzenia.
